ESTERILIZACION CON AUTOCLAVE Y HORNO DE SECADO

Se denomina esterilización al proceso validado por medio del cual se obtiene un producto libre de microorganismos viables. El proceso de esterilización debe ser diseñado, validado y llevado a cabo de modo de asegurar que es capaz de eliminar la carga microbiana del producto o un desafío más resistente.

 Se considera que un producto crítico es estéril cuando la probabilidad de que un microorganismo esté presente en forma activa o latente es igual o menor de 1 en 1.000.000

TIPOS DE ESTERILIZACION

Hay dos tipos de esterilización, vía seca y húmeda.

Vía seca: se usa el horno de secado por 2hrs a 180°. Se pueden esterilizar materiales de metal y vidrio.

Vía húmeda se usa la autoclave, durante 15min, la temperatura no es controlada, si no se controla la presión y se esterilizan medios de cultivo y material de vidrio.

ESTERILIZACION CON AUTOCLAVE 

MATERIALES:

1. Apósitos
2. Tijera
3. Tubos de ensayo
4. Algodón
5. Caja de petri
6. Matraz Enlermeyer
7. Gradilla
8. Cinta testigo
9. Papel estraza

PROCEDIMIENTO:

• Preparar el matraz. Se hace un tapón con el apósito, se hace un gorrito con el papel estraza y se asegura con la cinta.
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• Llenar el autoclave de agua solo hasta la marca.
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• Dentro de la camisa se va a introducir todos los materiales que queremos esterilizar.
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• Se cierra y sella en forma de cruz.
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• Verificar que todo esté en orden con la válvula de escape.
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• Encender nuestro Autoclave.
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• Esperar 15 minutos, es importante que la temperatura se mantenga en 1 nanómetro.
• Pasados los 15min, se abre en su totalidad la válvula de escape y se espera 5min.
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• Se abre
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• Se abre el desagüe, se enjuaga y seca.
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• Se sacan la muestra de la camisa, con mucho cuidado se limpia la camisa, después se desconecta y guarda el autoclave, se verifica que todo esté en orden.

HISTORIA DEL MICROSCOPIO

El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665 aparece en la obra de William Harvey sobre la circulación sanguínea al mirar al microscopio los capilares sanguíneos, y Robert Hooke publicó su obra Micrographia.  

En 1665 Robert Hooke observó con un microscopio un delgado corte de corcho y notó que el material era poroso, en su conjunto, formaban cavidades poco profundas a modo de celditas a las que llamó células. Se trataba de la primera observación de células muertas. Unos años más tarde, Marcello Malpighi, anatomista y biólogo italiano, observó células vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio.

A mediados del siglo XVII un holandés, Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricación propia, describió por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparación científica, puede considerarse el fundador de la bacteriología. Tallaba él mismo sus lupas, sobre pequeñas esferas de cristal, cuyos diámetros no alcanzaban el milímetro (su campo de visión era muy limitado, de décimas de milímetro). Con estas pequeñas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observó los glóbulos de la sangre, las bacterias y los protozoos; examinó por primera vez los glóbulos rojos y descubrió que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no reveló sus métodos secretos y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de Londres.

Durante el siglo XVIII continuó el progreso y se lograron objetivos acromáticos por asociación de Chris Neros y Flint Crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por John Dollond. De esta época son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersión y la refracción se podían modificar con combinaciones adecuadas de dos o más medios ópticos, se lanzan al mercado objetivos acromáticos excelentes.

Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecánicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron por el momento mejoras ópticas. Las mejoras más importantes de la óptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe publicó su teoría del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejoró la microscopía de inmersión sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los años 1930 se había alcanzado el límite teórico para los microscopios ópticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1,000X. Sin embargo, existía un deseo científico de observar los detalles de estructuras celulares (núcleo, mitocondria, etc.).

El microscopio electrónico de transmisión (TEM) fue el primer tipo de microscopio electrónico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrónico de barrido.

MICROSCOPIO

El microscopio (del griego μικρός micrós, ‘pequeño’, y σκοπέω scopéo, ‘mirar’)1 es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple vista. El tipo más común y el primero que se inventó es el microscopio óptico. Se trata de un instrumento óptico que contiene dos o más lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción. La ciencia que investiga los objetos pequeños utilizando este instrumento se llama microscopía.

PARTES DEL MICROSCOPIO 

Está conformado por tres sistemas: 

El sistema mecánico está constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque. 

El sistema óptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas 

El sistema de iluminación comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del microscopio. 

El sistema mecánico lo conforman: 

BRAZO.- Es la parte de donde se debe sujetar, las pinzas el carro el tubo del microscopio y el revolver. Además sirve para trasladar el microscopio de un lugar a otro. 

BASE O PIE.- Es una pieza que proporciona estabilidad y sirve de soporte a todas las partes del microscopio. 

PLATINA.- Es una pieza metálica, cuadrada, que tiene en su centro una abertura circular por la que pasará la luz del sistema de iluminación. Aquí se coloca el portaobjetos con la muestra a observar 

PINZAS DE SUJECION.- Parte mecánica que sirve para sujetar la preparación. La mayoría de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y transversal de la preparación. 

TORNILLO MACROMETRICO: Permite hacer un movimiento rápido hacia arriba o hacia abajo del tubo o la platina, y se utiliza para localizar la imagen a observar. 

TORNILLO MICROMETRICO O DE ENFOQUE SUAVEREVOLVER.- Parte mecánica de movimiento giratorio que nos permite colocar en posición cualquiera de los objetivos que se encuentran en él. 

TUBO.- Parte mecánica que proporciona sostén a los oculares y objetivos. 

CREMALLERA.- Permite que el movimiento de los tornillos macro y micrométrico sea de mayor o de menor amplitud. 

El sistema óptico; 

OCULAR.- Se localiza en la parte superior del tubo ocular y son las lentes que Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. Los primeros microscopios eran monoculares, es decir, poseían una sola lente. Los microscopios actuales poseen dos oculares, uno para cada ojo y se les llama binoculares. 

OBJETIVOS: Se encuentran incrustados en el revolver Son unos pequeños cilindros colocados en el revolver que proporciona el poder de resolución del microscopio y determinan la cantidad total de aumento. 

Existen 4 tipos entre los que se encuentran: 

1.- La lupa (4 X) que sirve para hacer observaciones a bajo aumento. 

2.- El objetivo seco débil (10 X) que se utiliza para localizar la imagen que se va a observar. 

3.- El objetivo seco fuerte (40 X) aumenta la imagen anterior, para poder observar se necesita primero acercar el objetivo al portaobjetos y posteriormente, enfocar el objetivo hasta que aparezca la imagen. 

4.- El objetivo de inmersión (100 X) es un lente especial para observar imágenes tan pequeñas como las bacterias. Y se requiere del aceite de inmersión para lograr una buena observación. 

La parte óptica del microscopio es la que determina el número de aumentos que presenta la imagen observada .El aumento total que permite un microscopio óptico se calcula multiplicando la magnificación que producen el objetivo por la que producen los oculares. 

Num. del objetivo X núm. de ocular = núm. de aumentos 

Ejemplo, si estamos usando un objetivo de 40x (aumenta 40 veces) y un ocular de 10x (aumenta 10 veces), el resultado final será de 400x, es decir, vemos la muestra aumentada 400 veces. 

Seco fuerte (40 x) x ocular (10 x) = 400 aumentos 

Usando microscopios ópticos avanzados se consiguen unos 1000-1500 aumentos (objetivo de 100x más oculares de 10x o 15x). Algunos microscopios ópticos tienen lentes internas que producen aumentos adicionales que tendremos que tener en cuenta para calcular la magnificación de la imagen que se observa. 

El sistema iluminación: 

La fuente luminosa consiste en un espejo o una fuente de luz eléctrica que dirige un haz de luz hacia el condensador. 

CONDENSADOR.- Es una lente de gran abertura que permite dirigir o condensar la mayor parte de los rayos luminosos en la preparación. En nuestro microscopio está integrado en la platina y tiene un diafragma unido en la parte inferior. 

DIAFRAGMA: Existe un diafragma en el condensador, que elimina el exceso de luminosidad para tener una buena iluminación del objeto a observar 

FUENTE DE LUZ.- Para observar la muestra microscópica es necesario que ésta se ilumine con algún tipo de luz y nuestros microscopios cuentan con un foco que da energía eléctrica que dirige sus rayos luminosos hacia el sistema condensador.

Es muy importante en un laboratorio biólogo como químico la buena identificación de las partes del microscopio.

¿COMO SACAR UNA MUESTRA DE SANGRE ?

1.Lo primero que debes hacer es presentarte con el paciente y explicarle lo que le vas a hacer.

Prepara todo tu material, jeringa, aguja (vacutainer en su caso), torunda con alcohol, tubos.

2. Tienes que buscar una buena vena para garantizar que obtengas suficiente sangre y sobre todo en un solo piquiete, esto al principio tal vez quieras picar las que se ven a traves de la piel, pero poco a poco te daras cuenta que no siempre serán las mejores, con las yemas de tus dedos deberás aprender a tocar en la parte de adentro del codo las venas, seria bueno que revisaras la antomia del brazo para que veas las venas que puede picar generalmente en esta parte del codo pasa una gorda por la parte de adentro y otra por afuera

3. Despues de que la localizaste vas a ligar el brazo, con una liga que colocaras a la mitad del brazo osea como 5-10cm arriba de donde picaras, puedes pedirle al paciente que abra y cierre su puño varias veces, esto permitira que la pinches con mayor certeza, hará esto mientras tu procedes a limpiar la zona donde picaras.

4. La limpieza generalmente se hace con una torunda de alcohol, en movimientos circulares de antero hacia afuera nunca regresando hacia adentro

5. Ya que esta limpio y tienes tu jeringa preparada la tomas y colocas la aguja a 45° con respecto al brazo con el bisel hacia arriba (el bisel es digamos el agujerito de la aguja si te fijas esta angulado, lo angulado va hacia arriba), y picas en el trayecto de la vena a 45°, saldrá la sangre por si sola manchando la base de la aguja, despues podrás obtener la que necesites.

Nota: al pinchar en el trayecto de la vena, procura pinchar un poco más abajo del sitio donde la sentiste mejor, para que al entrar con la jeringna no te pases de ese lugar y hasta ponches la vena... es un consejo extra poco a poco encontraras tu la forma en q obtengas facil las muestras

6. Cuando tienes la sangre necesaria quitas la ligadura, y despues retiras la aguja con cuidado coloca una torunda con alcohol en el brazo del paciente y que lo flexione unos 3 minutos.

7. Pon la sangre en los tubos correspondientes, te recomiendo que los tubos para biometria hematica y tiempos de cogaulación los muevas para evitar la coagulacion de la sangre.

Centrifugación

La centrifugación es un método por el cual se pueden separar sólidos de líquidos de diferente densidad por medio de una fuerza giratoria. La fuerza centrífuga es provista por una máquina llamada centrifugadora, la cual imprime a la mezcla un movimiento de rotación que origina una fuerza que produce la sedimentación de los sólidos o de las partículas de mayor densidad.

Los componentes más densos de la mezcla se desplazan fuera del eje de rotación de la centrífuga, mientras que los componentes menos densos de la mezcla se desplazan hacia el eje de rotación. De esta manera los químicos y biólogos pueden aumentar la fuerza de gravedad efectiva en un tubo de ensayo para producir una precipitación del sedimento en la base del tubo de ensayo de manera más rápida y completa.

TIPOS DE CENTRIFUGACIÒN 

1. Centrifugación analítica

Objetivo: medir las propiedades físicas de las partículas que sedimentan, tales como su coeficiente de sedimentación o su masa molecular. Especialmente en la variante ultracentrifugación analítica.

Las moléculas se observan mediante un sistema óptico durante la centrifugación. Los tubos de centrífuga deben ser de cuarzo para dejar pasar la luz visible y ultravioleta. Rotor basculante, observación en vertical.

2. Centrifugación preparativa

De uso más común. Objetivo: aislar partículas, células o moléculas para su análisis o utilización posterior. En general, se emplea mayor cantidad de muestra que en la analítica.

PRACTICA 

En el laboratorio de capacitacion  se decidió realizar  la práctica de centrifugación, 

la maestra le sacó sangre a un compañero y una compañera, qué también tiene conocimiento sobre  sacar sangre, apoyó a la maestra, una vez obtenida la sangre procedimos a centrifugar.

MATERIALES:

Centrífuga

Tubos de ensaye

Leche y sangre

Gradilla

Jeringa de 5ml o 3ml

PROCEDIMIENTO

a) Se tomó la muestra de sangre, la maestra con ayuda de una compañera sacaron la sangre de dos compañeros voluntarios, la sangre se depositó en unos tubos de ensaye. De igual manera pusimos leche en otros tubos de ensaye.

b) Después, ingresamos los tubos de ensaye en la centrifuga, de manera que los tubos de ensaye queden opuestos entre sí, lo mismo con los tubos de ensaye con la leche.

c) Luego, conectamos la centrifuga y la programamos, le pusimos el tiempo que iba a tardar trabajando.

d) Por último, esperamos que el tiempo transcurriera, al terminar el periodo, sacamos las muestras y observamos los resultados. Verificamos que la centrifuga estuviera bien, la desconectamos y se entregó a la maestra para que ella la guardara.

BALANZA ANALITICA

Una balanza analítica es una clase de balanza de laboratorio diseñada para medir pequeñas masas, en un principio de un rango menor del miligramo (y que hoy día, las digitales, llegan hasta la diezmilésima de gramo: 0,0001 g o 0,1 mg). Los platillos de medición de una balanza analítica están dentro de una caja transparente provista de puertas para que no se acumule el polvo y para evitar que cualquier corriente de aire en la habitación afecte al funcionamiento de la balanza. (A este recinto a veces se le llama protector de corriente, draft shield). El uso de un cierre de seguridad con ventilación equilibrada, con perfiles aerodinámicos acrílicos diseñados exclusivamente a tal fin, permite en el interior un flujo de aire continuo sin turbulencias que evita las fluctuaciones de la balanza y que se puedan medida de masas por debajo de 1 μg sin fluctuaciones ni pérdidas de producto. Además, la muestra debe estar a temperatura ambiente para evitar que la convección natural forme corrientes de aire dentro de la caja que puedan causar un error en la lectura.

La balanza analítica electrónica mide la fuerza necesaria para contrarrestar la masa que está siendo medida en lugar de utilizar masas reales. Por ello deben tener los ajustes de calibración necesarios realizados para compensar las diferencias gravitacionales. Utilizan un electroimán para generar la fuerza que contrarreste la muestra a medir y da el resultado midiendo la fuerza necesaria para equilibrar la balanza. Tal dispositivo de medición se denomina sensor de restauración de fuerza electromagnética.

Fue desarrollada alrededor de 1750 por el químico escocés Joseph Black y al ser mucho más precisa que cualquier otra balanza de la época, se convirtió en un importante instrumento científico en la mayoría de los laboratorios de química.

DESCRIPCIÓN DEL EQUIPO 

La balanza analítica es la que nos proporciona mayor exactitud, es por eso que es usada de preferencia en ambientes como los laboratorios clínicos y de investigación, en donde se requiere de gran precisión en la medida.

 Balanza Analítica

1. Botón de liberación de platos

2. Botón de liberación del fiel

3. Escala de centésimas de gramo

4. Soporte de platillos

5. Tornillos de base

6. Botón de movilización de caballete

7. Platillos

8. Escala de décimas de gramo

CUIDADOS PARA LA BALANZA ANALITICA

a) La balanza debe protegerse de las variaciones de temperatura y humedad, exposición a la luz solar, no colocarse cerca de hornos, baños de María, etc.,tanto al almacenarse como en su uso, ya que los objetos calientes o tibios tienen un peso menor que cuando están fríos, debido a corrientes que se

establecen con el aire que los rodea.

b) Debe colocarse en una mesa que sea firme y protegerla de vibraciones (de ser posible una mesa exclusiva para ella).

c) Los platillos y el fiel deben descansar en sus soportes, siempre que no se está utilizando la balanza.

d) La campana debe permanecer siempre cerrada.

e) Mientras la balanza está oscilando, la sustancia a pesar no debe colocarse sobre los platillos, ni removerse. Para colocar el peso, debe de estar cerrado el fiel y los platillos colocados sobre los soportes.

f) Si se derrama algún reactivo durante la pesada, hay que limpiar de inmediato con un paño limpio y seco.

g) No manipular con los dedos, hay que utilizar las pinzas que se encuentran en la caja de pesas.

h) Para mantener un ambiente libre de humedad dentro de la campana, colocar en las esquinas de la misma dos beakers (de 100 ml.) llenos de sílica gel o Carbonato de Sodio.

i) Los pesos mayores de 1 gr deben ser añadidos estando el brazo en posición de reposo, pues de lo contrario se puede dañar la porción oscilante que une el platillo al brazo. El brazo siempre debe soltarse suave y lentamente.

j) Se debe observar si hay una marcada oscilación del platillo después de soltarse el brazo, pues esto indica falta de alineación. La alineación debe hacerla personal capacitado. Repórtela al departamento de mantenimiento.

k) La balanza debe protegerse de corrientes de aire, pues estas producen inestabilidad. Se requiere más o menos 15 minutos con 30 segundos para que el flujo de aire cese después de que se ha cerrado la puerta.

OPERACIÓN DEL EQUIPO  

a) Antes de iniciar el uso de la balanza, asegúrese que todo el sistema esté a 0 (calibrado). 

b) Para pesar una carga, debe pesarse primero el papel para film o papel encerado y a ese peso sumarle la sustancia que se desea pesar.

c) Se coloca la sustancia que se va a pesar, en el platillo de la izquierda y en el platillo de la derecha las unidades de gramo.

d) Cuando se inicia el proceso de pesado primero se liberan los platillos de sus soportes con el botón lateral y luego se libera el fiel, con el botón central.

e) Cuando se ha liberado el fiel, nos indica de acuerdo a su desplazamiento, si la sustancia que estamos pesando, necesita mayor o menor peso.

f) Las unidades de gramos, las colocamos sobre el platillo de la derecha, las décimas sobre la escala superior.

g) Para obtener las centésimas y milésimas de gramos, se busca en la escala colocada al lado derecho de los platillos, se toma como referencia el 0 de un pequeño nonius colocado bajo la escala.

BALANZA GRANATARIA

En la clase , la maestra nos mostro unos videos hacerca de la balanza granataria, su uso, cuidados , funcionamiento, etc 

Una Balanza granataria es un tipo de balanza muy sensible, esto quiere decir que pesa cantidades muy pequeñas y también es utilizada para determinar o pesar la masa de objetos y gases.

CAPACIDAD DE MEDIDA DE UNA BALANZA GRANATARIA 

Normalmente las balanzas granatarias tienen una capacidad para medir entre 2 y 2,5 kg con una precisión de hasta 0.1 o 0.01 g. Por otro lado debemos recalcar que algunas balanzas granatarias pueden tener otras capacidad de medida que pueden llegar a los 100 o 200 g con una precisión de hasta 0.001 g, aunque a todo esto debemos añadir que en ciertas ocasiones poco comunes las balanzas granatarias pueden medir 25 kg con una interesante precisión de 0.05 g.

USOS GENERALES DE LA BALANZA GRANATARIA 

Entre la gran cantidad de funciones que tiene esta báscula destaca que generalmente es tenida en cuenta como un instrumento auxiliar de la balanza analítica, puesto que la precisión de la misma es un poco más baja que la de la báscula analítica. Por otro lado, la balanza granataria destaca frente a todas las demás basculas de laboratorio por que puede llegar a tomar medidas mucho más grandes que las demás, añadiendo a lo anterior que esta permite hacer mediciones de una manera mucho más sencilla y rápida.

MODO DE USO DE LA BALANZA 

Para obtener los resultados correctos de una balanza granataria debemos apoyarla en una superficie rígida y sin ningún tipo de desniveles, ya que cualquier tipo de objeto que modifique este tipo de cosas durante la medición va a hacer que tengamos datos incorrectos que nos lleven a fallar en todo lo relacionado a nuestra experiencia en el laboratorio. Por otro lado, la balanza granataria debe ser calibrada cada cierto tiempo, además en cada momento que nos traslademos o la llevemos a sectores diferente al que fue correctamente calibrada, la misma debe ser revisada exhaustivamente para tener los mejores resultados posibles y obviamente no encontrarnos con ningún error durante el proceso de medición.

CUIDADOS DE LA BALANZA GRANATARIA

La limpieza es un factor esencial para el excelente cuidado de la bascula granataria, por lo cual recomendamos tenerla totalmente alejada de todo tipo de sustancias que pueden afectar de alguna manera la precisión de este elemento, añadiendo a lo anterior que estas sustancias no pueden ser ubicadas en el plato de la balanza granataria sino en el contenedor de la misma, puesto que si en algún momento este tipo de objetos afectas a este instrumento del laboratorio vamos a perder gran parte de la calibración y obviamente de la buena manera de obtener la medida de los objetos. Por otro lado, los cuidados para las balanzas electrónicas es poner siempre en ceros la lectura con el contenedor, una técnica que es conocida normalmente en este tipo de ambientes como tarar la balanza, ya que esto nos permite nos tener que descontar en otra ocasión siguiente la masa del contenedor.